qPCR المجففة بالتبريد مقابل PCR الكاشف الرطب و LAMP لفحص مسببات أمراض الروبيان في المزرعة

لماذا يتم فحص الجمبري، وليس علاجه

تمتلك القشريات جهاز مناعة فطري فقط: لا توجد أجسام مضادة، ولا ذاكرة مناعية، ولا يوجد لقاح. البركة التي نجت من البقعة البيضاء العام الماضي ليست محمية هذا العام. وبالتالي فإن المكافحة تعني استبعاد اليرقات المصابة، والأمهات، والأعلاف الحية والناقلات، والكشف المبكر أثناء المحصول، وبالتالي فإن النتيجة الإيجابية تؤدي إلى حصاد جزئي أو تغيير في الإدارة قبل انهيار الحوض. كل واحد من هذه القرارات هو عبارة عن اختبار جزيئي، ومعظمها يجب أن يتم اتخاذه في مكان لا يوجد فيه مختبر.

مقارنة أربع طرق جزيئية

التقليدية والمتداخلة PCR. المرجع التاريخي لWSSV، IHHNV وEHP. تعطي جولتان من التضخيم والهلام حساسية عالية جدًا، لكن الجولة الثانية ذات الأنبوب المفتوح هي المصدر الكلاسيكي لتلوث الأمبليكون، ويستغرق التشغيل من ثلاث إلى أربع ساعات، والنتيجة هي شريط يمكن قراءته بالعين، ويتطلب مختبرًا مناسبًا بغرف منفصلة.

في الوقت الحقيقي (الكمي) PCR. الكشف عن مضان الأنبوب المغلق، والنتيجة في حوالي ساعة، وقيمة عتبة الدورة التي تعكس حمل مسببات الأمراض. أهمية التحميل في الجمبري: النتيجة الإيجابية الضعيفة في بركة التسمين والإيجابية القوية في مجموعة ما بعد اليرقات تتطلب إجراءات مختلفة. يسرد WOAH تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي جنبًا إلى جنب مع تفاعل البوليميراز المتسلسل المتداخل كطريقة موصى بها لفيروسات الجمبري الرئيسية.

LAMP والكيمياء متساوية الحرارة الأخرى. تسخين سريع وبسيط وقراءة مرئية. جذابة للاستخدام الميداني، ولكن التصميم التمهيدي لـ LAMP المكون من ستة أجهزة تمهيدية أمر صعب، كما أن تعدد الإرسال محدود، كما أن إنتاجية الأمبليكون العالية جدًا تجعل التلوث المرحل خطرًا مستمرًا في بيئة المزرعة. من الأفضل استخدامه كشاشة ذات هدف واحد مع فصل مادي صارم للخطوات.

PCR اللحظي المُجفَّد (المجفف بالتجميد). الكيمياء نفسها المستخدمة في qPCR بالكواشف السائلة، مع تجفيف المزيج الرئيسي والبادئات والمسبار داخل الأنبوب. يضيف المشغّل المستخلص والماء، ثم يدخل الأنبوب مباشرةً إلى جهاز التحليل. وبذلك تُلغى خطوة سحب الإنزيمات بالماصة ومعظم فرص التلوث في خطوة واحدة.

ما هي تغييرات التجميد والتجفيف

سلسلة التبريد. يجب أن يبقى المزيج الرئيسي السائل مجمدًا من المصنع حتى طاولة المختبر، ولا يتحمل سوى عدد قليل من دورات التجميد والإذابة. ولا تستطيع مزرعة تبعد ثلاث ساعات عن أقرب مُجمِّد، أو مفرخ تنقطع عنه الكهرباء أسبوعيًا، الحفاظ عليه. أما المجموعة المجففة بالتجميد، فقارن درجة حرارة التخزين ومدة الصلاحية المطبوعتين على الملصق وفي نشرة العبوة بالظروف السائدة في الموقع؛ ونرسل نشرة العبوة مع عرض السعر.

خطوات عملية. باستخدام الكواشف الرطبة، يقوم المشغل بماصة المخزن المؤقت والإنزيم والبادئات والمسبار والقالب في كل أنبوب؛ كل عملية نقل هي فرصة للتلوث ومتطلبات التدريب. مع الأنبوب المجفف هناك نوعان من الإضافات، المستخلص والماء. وهذا هو السبب في أن فني المفرخ الذي حصل على تدريب لمدة يوم واحد يدير المفرخ بشكل موثوق.

تناسق. يحمل كل أنبوب في الكمية نفس كتلة الكاشف؛ لا يوجد اختلاف في الأنابيب بين عمليات التشغيل أو المشغلين، وهو ما يجعل قيم Ct قابلة للمقارنة من أسبوع لآخر في نفس البركة.

حساسية. تتوافق الكيمياء المجففة بالتجميد بشكل صحيح مع معادلها الرطب؛ يحمي التجفيف بالتجميد الإنزيم بدلاً من إتلافه. يتم ذكر حدود الكشف لخط تربية الأحياء المائية لكل مجموعة على صفحات المنتج.

خطة أخذ العينات التي تعني شيئا

إن الاختبار السلبي الذي تم إجراؤه على عشرة جمبري لا يقول سوى القليل عن بركة تحتوي على مليون. تعطي جداول عينات WOAH عدد الحيوانات اللازمة للكشف عن العامل الممرض عند معدل انتشار معين مع ثقة بنسبة 95 بالمائة في عدد كبير من السكان: 150 حيوانًا بنسبة انتشار 2 بالمائة، و60 حيوانًا بنسبة انتشار 5 بالمائة، و30 حيوانًا بنسبة انتشار 10 بالمائة. يتم تجميع مرحلة ما بعد اليرقات، لذا فإن اختبار الاعتماد على الدفعة عادة ما يكون عبارة عن عينة مجمعة من 150 حيوانًا، يتم تقسيمها أحيانًا إلى عدة مجموعات بحيث يمكن تحديد موقع النتيجة الإيجابية.

أثناء المحصول، يعد أخذ عينة مجمعة من 10 إلى 20 جمبريًا من صينية التغذية كل أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع، بالإضافة إلى الرواسب من منطقة التغذية بين المحاصيل، هو الحد الأدنى العملي. يتم اختبار الأمهات بشكل غير مميت من البراز أو خزعة ثنية الأرجل؛ يتم اختبار الأعلاف الحية مثل متعددات الأشواك دفعة واحدة قبل دخولها إلى المفرخ.

سير العمل في المزرعة، عينة للقرار

الجمع: اليرقات المتأخرة (ما بعد اليرقات)، أو الأنسجة، أو الخياشيم، أو البنكرياس الكبدي، أو البراز، أو العلف، أو الماء، عند البركة أو في المفرخ. التحضير: محلول منظم لا يتطلب استخلاصًا للأنسجة في خمس دقائق، أو مجموعة الخرز المغناطيسي للماء والرواسب والدفعات. التشغيل: أعد ترطيب الأنبوب المجفف بالتجميد بالمستخلص، ثم حمّله في المحلل المدمج؛ ومع المحلول المنظم الذي لا يتطلب استخلاصًا والمجموعات ذات الـ 24 اختبارًا، تظهر النتيجة وقيمة Ct الخاصة بها على الشاشة بعد نحو 50 دقيقة من أخذ العينة. القرار: رفض الدفعة أو قبولها، أو إيقاف العلف الحي أو مواصلته، أو الحصاد المبكر أو إكمال الدورة. وتكتمل الحلقة بأكملها خلال فترة ما بعد الظهر، في الموقع، وهذا ما يفرّق بين برنامج فحص يُطبَّق فعلًا وبرنامج لا وجود له إلا على الورق.

التكلفة، في الوحدات الوحيدة التي تهم

يكلف الاختبار بضعة دولارات من الكاشف وساعة من وقت الفني. ويكلف المحصول المفقود التخزين والعلف والطاقة والموسم. يقوم المفرخ الذي يعتمد كل دفعة بواسطة qPCR ببيع اليرقات بسعر أعلى ويحافظ على عملائه؛ مزرعة تقوم بالفحص عند التخزين وتحول تفشي فيروس WSSV من خسارة كاملة إلى حصاد مبكر جزئي كل أسبوعين. المقارنة بين الطرق المذكورة أعلاه حقيقية، ولكن المقارنة بين الاختبار وليس الاختبار هي التي تقرر ما إذا كانت المزرعة لا تزال موجودة في العام المقبل.

تمت كتابته بواسطة فريق منتج Medicare Vet بناءً على بيانات الشركة المصنعة وتوجيهات WOAH والتحقق المنشور. ليس بديلاً عن المشورة البيطرية أو المخبرية في السوق الخاص بك.